AAT Bioquest 13814/13815 Amplite® Fluorimetric/Colorimetric L-Lactate Assay Kit

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美國(guó)AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開(kāi)發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷(xiāo)售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助quan世界的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest會(huì)不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個(gè)領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest  13814  Amplite® Fluorimetric L-Lactate Assay Kit  200 Tests

AAT Bioquest  13815  Amplite® Colorimetric L-Lactate Assay Kit  200 Tests

 AAT Bioquest  熒光/比色L-乳suan測(cè)定試劑盒

AAT Bioquest  13814  Amplite® Fluorimetric L-Lactate Assay Kit  200 Tests產(chǎn)品說(shuō)明：

乳酸是手性的，具有兩種光學(xué)異構(gòu)體：L-乳酸和D-乳酸。乳酸在新陳代謝和運(yùn)動(dòng)過(guò)程中通過(guò)乳酸脫氫酶（LDH）不斷由**酸產(chǎn)生。監(jiān)測(cè)乳酸水平是評(píng)估組織需氧量和利用量之間平衡的好方法，在研究細(xì)胞和動(dòng)物生理學(xué)時(shí)很有用。D-乳酸不被哺乳動(dòng)物代謝，其從體內(nèi)消除主要取決于腎臟排泄。D-和L-乳酸存在于許多發(fā)酵乳制品中，如酸奶和奶酪，也存在于腌制蔬菜和腌制肉類(lèi)和魚(yú)類(lèi)中。D-和L-乳酸（由細(xì)菌產(chǎn)生）是食物的質(zhì)量指標(biāo)，如雞蛋、牛奶、果汁和葡萄酒。血液中異常高濃度的D-乳酸通常反映了胃腸道中細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)。亞洲空運(yùn)中心Bioquest的Amplite®乳酸檢測(cè)試劑盒（L-乳酸檢測(cè)的Cat#13814和13815，D-乳酸檢測(cè)的Cat#13810和13811）提供基于熒光和吸光度的方法，用于檢測(cè)血清、血漿、尿液等生物樣品以及細(xì)胞培養(yǎng)樣品中的L-乳酸或D-乳酸。在酶偶聯(lián)測(cè)定中，乳酸與NADH成比例相關(guān)，NADH由熒光NADH傳感器特異性監(jiān)測(cè)。熒光酶標(biāo)儀可以讀取信號(hào)。使用這款熒光Amplite ® L-乳酸檢測(cè)試劑盒，我們能夠在 1 μL 反應(yīng)體積中檢測(cè)到低至 4.100 μM 的 L-乳酸。

平臺(tái)

熒光酶標(biāo)儀

Excitation 540 納米

Emission 590 納米

Cutoff     570 納米

推薦板 純黑色

組件

組分A：酶混合物    2瓶（凍干粉）

組分B：檢測(cè)緩沖液 1 瓶 （10 mL）

組件 C：NAD        1瓶

組分D：L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品 2.25毫克/瓶

示例協(xié)議

一目了然

協(xié)議摘要

1. 制備L-乳酸工作溶液（50μL）

2. 加入L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 μL）

3. 在室溫下孵育30分鐘 - 2小時(shí)

4. 在Ex/Em = 540/590 nm處監(jiān)測(cè)熒光增加

重要注意事項(xiàng)

在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍每個(gè)試劑盒組分的一小瓶。

儲(chǔ)備液的制備

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1. NAD 儲(chǔ)備液 （100X）：

加入 100 μL H2O放入NAD（組分C）的小瓶中，制成100X NAD儲(chǔ)備溶液。

2. L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mM）：

加入 200 μL H2O或1x PBS緩沖液放入L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）的小瓶中，制成100 mM L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品

將 10 μL L-乳酸儲(chǔ)備溶液加入 990 μL PBS 緩沖液中，生成 1 mM L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 （Lac7）。取1 mM L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液并進(jìn)行1：3系列稀釋?zhuān)垣@得L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（Lac6 - Lac1）的系列稀釋液。注意：稀釋的L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

工作溶液的制備

將 5 mL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）加入一瓶酶探針（組分 A）中。將 50 μL NAD 儲(chǔ)備溶液 （100X） 加入組分 A 的瓶中，并充分混合。注意：這種L-乳酸工作溶液不穩(wěn)定，應(yīng)及時(shí)使用。

實(shí)驗(yàn)方案樣本

表 1.L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品在純黑色96孔微孔板中的布局。Lac= L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（Lac1 - Lac7，1μM至1 mM），BL=空白對(duì)照，TS=測(cè)試樣品。

提單 提單 TS TS

紫膠1 紫膠1 ... ...

紫膠2 紫膠2 ... ...

紫膠3 紫膠3    

紫膠4 紫膠4    

紫膠5 紫膠5    

紫膠6 紫膠6    

紫膠7 紫膠7    

表 2.每個(gè)孔的試劑組成。

井 卷 試劑

紫膠1 - 紫膠7 50 微升 連續(xù)稀釋?zhuān)?/span>1 μM 至 1 mM）

提單 50 微升 稀釋緩沖液

TS 50 微升 測(cè)試樣品

1. 根據(jù)表1和2中提供的布局制備L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（Lac），空白對(duì)照（BL）和測(cè)試樣品（TS）。對(duì)于 384 孔板，每孔使用 25 μL 試劑而不是 50 μL。

2. 向L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品、空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中加入50 μL L-乳酸工作溶液，使L-乳酸測(cè)定總體積為100μL/孔。對(duì)于 384 孔板，向每個(gè)孔中加入 25 μL L-乳酸工作溶液，總體積為 50 μL/孔。

3. 將反應(yīng)物在室溫下孵育30分鐘至2小時(shí)，避光。

4. 使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 530 - 570 nm，發(fā)射= 590 - 600 nm（優(yōu)良Ex / Em = 540 / 590 nm，在570 nm處截止）監(jiān)測(cè)熒光增加。

AAT Bioquest  13815  Amplite® Colorimetric L-Lactate Assay Kit  200 Tests，產(chǎn)品說(shuō)明：

乳酸是手性的，具有兩種光學(xué)異構(gòu)體：L-乳酸和D-乳酸。乳酸在新陳代謝和運(yùn)動(dòng)過(guò)程中通過(guò)乳酸脫氫酶（LDH）不斷由**酸產(chǎn)生。監(jiān)測(cè)乳酸水平是評(píng)估組織需氧量和利用量之間平衡的好方法，在研究細(xì)胞和動(dòng)物生理學(xué)時(shí)很有用。D-乳酸不被哺乳動(dòng)物代謝，其從體內(nèi)消除主要取決于腎臟排泄。D-和L-乳酸存在于許多發(fā)酵乳制品中，如酸奶和奶酪，也存在于腌制蔬菜和腌制肉類(lèi)和魚(yú)類(lèi)中。D-和L-乳酸（由細(xì)菌產(chǎn)生）是食物的質(zhì)量指標(biāo)，如雞蛋、牛奶、果汁和葡萄酒。血液中異常高濃度的D-乳酸通常反映了胃腸道中細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)。亞洲空運(yùn)中心Bioquest的Amplite®乳酸檢測(cè)試劑盒（L-乳酸檢測(cè)的Cat#13814和13815，D-乳酸檢測(cè)的Cat#13810和13811）提供基于熒光和吸光度的方法，用于檢測(cè)血清、血漿、尿液等生物樣品以及細(xì)胞培養(yǎng)樣品中的L-乳酸或D-乳酸。在酶偶聯(lián)測(cè)定中，乳酸與NADH成比例相關(guān)，NADH由顯色NADH傳感器特異性監(jiān)測(cè)。吸光度酶標(biāo)儀可以在~A575nm/A605nm的吸光度比下輕松讀取該信號(hào)，以提高測(cè)定靈敏度。使用這種比色Amplite ® L-乳酸檢測(cè)試劑盒，我們能夠在 4 μL 反應(yīng)體積中檢測(cè)到低至 100 μM 的 L-乳酸。

平臺(tái)

吸光度酶標(biāo)儀

吸光度 575/605 納米

推薦板 清除底部

組件

組分A：酶探針 2瓶（凍干粉）

組分B：檢測(cè)緩沖液 1 瓶 （10 mL）

組件 C：NAD 1瓶

組分D：L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品 2.25毫克/瓶

示例協(xié)議

一目了然

協(xié)議摘要

1. 制備L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 μL）

2. 加入L-乳酸工作溶液（50μL）

3. 在室溫下孵育30分鐘 - 2小時(shí)

4. 監(jiān)測(cè)吸光度比在A處增加575納米/一個(gè)605納米

重要 在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍每個(gè)試劑盒組分的一瓶。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1. NAD儲(chǔ)備液（100X）

加入 100 μL H2O放入NAD（組分C）的小瓶中，制成100X NAD儲(chǔ)備溶液。

2. L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mM）

加入 200 μL H2O或1x PBS緩沖液放入L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）的小瓶中，制成100mM L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品

將 10 μL 100 mM L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液加入 990 μL 1xPBS 緩沖液中，生成 1 mM L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 （SD7）。取1 mM L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD7），在1xPBS緩沖液中進(jìn)行3：1連續(xù)稀釋?zhuān)垣@得連續(xù)稀釋的L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（SD6 - SD1）。注意：稀釋的L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

工作溶液的制備

1. 將 5 mL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）加入一瓶酶探針（組分 A）中，并充分混合。

2. 將 50 μL 100X NAD 儲(chǔ)備溶液加入組分 A+B 的瓶中，充分混合制成 L-乳酸工作溶液。

注意 這種L-乳酸工作溶液足以用于一個(gè)96孔板。不穩(wěn)定，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)及時(shí)使用。避免暴露在光線下。

注意 或者，可以通過(guò)將 50 μL H 100 O 加入酶混合物瓶（組分 A）中來(lái)制備 2X 的 L-乳酸酶儲(chǔ)備溶液，然后將儲(chǔ)備溶液與測(cè)定緩沖液（組分 B）和 100X NAD 儲(chǔ)備溶液按比例混合來(lái)制備 L-乳酸工作溶液。

實(shí)驗(yàn)方案樣本

表 1. L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品在白色透明底部96孔微孔板中的布局。SD=L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（SD1 - SD7，1至1000μM），BL=空白對(duì)照，TS=測(cè)試樣品。

表 2. 每個(gè)孔的試劑組成。

1. 根據(jù)表1和表2中提供的布局制備L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（SD），空白對(duì)照（BL）和測(cè)試樣品（TS）。對(duì)于 384 孔板，每孔使用 25 μL 試劑而不是 50 μL。

2. 向L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品、空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中加入50 μL L-乳酸工作溶液，使L-乳酸測(cè)定總體積為100μL/孔。對(duì)于 384 孔板，向每個(gè)孔中加入 25 μL L-乳酸工作溶液，總體積為 50 μL/孔。

3. 將反應(yīng)物在室溫下孵育30分鐘至2小時(shí)，避光。

4. 用吸光板讀數(shù)儀在A處監(jiān)測(cè)吸光度比增加575納米/一個(gè)605納米.

  AAT Bioquest  熒光/比色L-乳suan測(cè)定試劑盒

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