土壤植酸酶（phytase）試劑盒說(shuō)明書

更新時(shí)間：2025-01-13

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土壤植酸酶（phytase）試劑盒說(shuō)明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

植酸酶（phytase）是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸（鹽）的一類酶的總稱，屬磷酸單酯水解酶，它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉(zhuǎn)化為可供有機(jī)體利用的有效磷，降低糞便中的磷含量，減輕對(duì)環(huán)境的污染，改善營(yíng)養(yǎng)成分的吸收和利用，因此具有極其廣泛的研究和應(yīng)用價(jià)值。

測(cè)定原理：

植酸酶在一定溫度和pH 值條件下，水解底物植酸鈉生成無(wú)機(jī)磷與肌醇衍生物，無(wú)機(jī)磷在酸性環(huán)境中與鉬酸銨顯色劑反應(yīng)生成藍(lán)色復(fù)合物，在 700nm 處有特征吸收峰，根據(jù) 700nm 處吸光值變化可計(jì)算得植酸酶活性。

組成：

產(chǎn)品名稱	BO6092-50T/24S	Storage
緩沖液：液體	60ml	4℃
試劑一：粉劑	1 瓶	4℃避光
試劑二：液體	30ml	4℃
顯色劑：粉劑	6 瓶	4℃避光
說(shuō)明書	一份

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃避光保存，臨用前加緩沖液 30ml 配制，現(xiàn)用現(xiàn)配；用不完的試劑 4℃保存一個(gè)月。

顯色劑：粉劑×6 瓶，4℃避光保存，臨用前根據(jù)用量每瓶加 1ml 雙蒸水溶解，再加 4ml 試劑二混勻。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1ml 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋，甲苯（不允許快遞）。

樣本處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩。

測(cè)定操作表：

對(duì)照管

測(cè)定管

樣本（g）	0.06	0.06
甲苯	40	40
振蕩混勻，室溫放置 15min
緩沖液（µl）	1000
試劑一（µl）		1000
混勻，37℃孵育 24h，10000g，4℃離心 5min，取上清
上清	500	500
顯色劑（µl）	500	500
混勻，靜置 15min，測(cè)定 700nm 處吸光值，△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

酶活性計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.759x + 0.0084，R² = 0.9977；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml ），y 為吸光值△A。

酶活性定義：在 37℃，pH5.5 的條件下，每克土樣每小時(shí)從 5mmol/L 的植酸鈉溶液中釋放出 1μmol 的無(wú)機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。

植酸酶活性（μmol/h /g 土樣）=（△A-0.0084）÷1.759×V 反總÷W÷T

=0.41×（△A-0.0084）

V 反總：反應(yīng)總體積，1.04ml ；T：反應(yīng)時(shí)間，24h；W：樣本質(zhì)量，0.06g。

注意事項(xiàng)：

1、顯色劑需要臨用前根據(jù)用量配制，每一瓶是 5 個(gè)樣本的用量，新配制的顯色劑若有顏色則已經(jīng)污染或者試劑過期，應(yīng)放棄使用。

2、ΔA 線性范圍為 0.01-1。