土壤β-木糖苷酶測定試劑盒說明書

更新時間：2025-01-13

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土壤β-木糖苷酶（Solid-β- xylosidase, S-β-XYS）測定試劑盒說明書

微量法 100T/48S

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶，產(chǎn)物木糖可作為碳源應用于微生物發(fā)酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應用于造紙工業(yè)，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保，具有廣泛的應用價值。

S-β-XYS 催化對硝基苯酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對硝基苯酚，對硝基苯酚在 405nm 處有特征吸收峰，測定405nm 光吸收增加速率，可計算S-β-XYS 活性。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。

約 0.1g 鮮土或風干土樣，加入 1ml 提取液進行冰浴勻漿，室溫振蕩提取 30min，然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清待測。

1、分光光度計/酶標儀預熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 405nm。

2、操作表

	對照管	測定管
樣本（μl）	40	40

試劑一（μl）		10
試劑二（μl）	80	70
混勻，45℃水浴 20min
試劑三（μl）	80	80
混勻，靜置 5min，405nm 處測定吸光值A，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y=13.226x+0.0011，R²=0.9998；x 為標準品濃度（μmol/ml），y 為吸光值ΔA。酶活定義：每克土樣每天催化產(chǎn)生 1μmol 對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土樣）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T

=16.33×(ΔA-0.0011)÷W

V 樣總：加入提取液體積，1ml； V 反總：反應總體積，0.12ml；V 樣：反應中樣品體積，0.04ml； W：樣品質(zhì)量，g；T：反應時間，20min=1/72d；

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y=6.613x+0.0011，R²=0.9998；x 為標準品濃度（μmol/ml），y 為吸光值ΔA酶活定義：每克土樣每天催化產(chǎn)生 1μmol 對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土樣）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T

=32.66×(ΔA-0.0011)÷W

V 樣總：加入提取液體積，1ml； V 反總：反應總體積，0.12ml；V 樣：反應中樣品體積，0.04ml； W：樣品質(zhì)量，g；T：反應時間，20min=1/72d；

ΔA 控制在 0.01-1 范圍內(nèi)，若ΔA 大于 1，可適當減小樣本量。標準曲線線性范圍為：0.01μmol/ml-0.5μmol/ml。